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細胞凋亡與壞死檢測試劑盒

細胞凋亡與壞死檢測試劑盒

產(chǎn)品編號:AH1060

產(chǎn)品規(guī)格:100次

數(shù)量
價格 ¥400

細胞凋亡與壞死檢測試劑盒

 

貨號

名稱

規(guī)格

AH1060

細胞凋亡與壞死檢測試劑盒

100

●  產(chǎn)品組成:

組分貨號

名稱

規(guī)格

貯存

AH1060-01

細胞染色緩沖液

100 ml

4

AH1060-02

Hoechst 33342染色液

0.5 ml

-20

AH1060-03

PI染色液

0.5 ml

-20

 

說明書

一份

 

● 產(chǎn)品簡介:

細胞凋亡與壞死檢測試劑盒(Apoptosis and Necrosis Assay Kit)可以快速檢測細胞凋亡與細胞壞死。本試劑盒采用Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)雙染的方法。細胞發(fā)生凋亡時,染色質(zhì)會固縮。Hoechst 33342可以穿透細胞膜,染色后凋亡細胞熒光會比正常細胞明顯增強。碘化丙啶(PI)不能穿透細胞膜,對于具有完整細胞膜的正常細胞或凋亡細胞不能染色。而對于壞死細胞,其細胞膜的完整性喪失,碘化丙啶(PI)可以染色壞死細胞。上述兩種染料雙染后,使用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測時,正常細胞為弱紅色熒光+弱藍色熒光,凋亡細胞為弱紅色熒光+強藍色熒光,壞死細胞為強紅色熒光+強藍色熒光。

按照每個樣品細胞數(shù)量100萬計算,該試劑盒可以使用100次。

● 貯存:

避光按照標簽溫度保存,一年有效。

● 操作步驟:

. 貼壁細胞:

1.1在培養(yǎng)液中(細胞數(shù)量控制在106以內(nèi))均勻滴加適量的Hoechst 33342染色液和PI染色液,輕柔混勻。例如對于十二孔板中培養(yǎng)的貼壁細胞,每孔有1 ml的培養(yǎng)液,每孔需要加入5 μl Hoechst 33342染色液和5 μl PI染色液。培養(yǎng)液中的血清、酚紅等都不會對染色產(chǎn)生干擾。

1.2混勻,37℃培養(yǎng)15分鐘,直接在顯微鏡下觀察;如果考慮到液體對拍照的乙酰個,可以吸除含染料的培養(yǎng)液,用染色緩沖液洗滌2-3次即可在熒光顯微鏡下觀察。

注:為避免凋亡細胞隨培養(yǎng)液或染色緩沖液被吸除,在吸除液體前,對于用多孔板中培養(yǎng)的細胞,最好用多孔板離心機離心一下以充分沉淀那些已經(jīng)漂浮起來的凋亡細胞。

. 懸浮細胞:

2.1 在懸浮細胞培養(yǎng)液中加入適量的Hoechst 33342染色液和PI染色液,輕柔混勻。例如對于十二孔板中培養(yǎng)的懸浮細胞,每孔有1 ml的培養(yǎng)液,每孔需要加入5 μl Hoechst 33342染色液和5 μl PI染色液。培養(yǎng)液中的血清、酚紅等都不會對染色產(chǎn)生干擾。

2.2混勻,37℃培養(yǎng)15分鐘,將細胞轉移到1.5 ml離心管中,500 g 離心5分鐘收集細胞。

2.3細胞沉淀用細胞染色緩沖液洗兩遍,每次3分鐘,吸盡液體。洗滌時宜用搖床或手動晃動。

2.4細胞沉淀中加入100 μl 細胞染色緩沖液,重懸沉淀。

2.5取5 μl抗熒光淬滅封片液于載玻片上,加入等體積步驟2.4染色后細胞重懸液,蓋上一潔凈的蓋玻片,盡量避免氣泡。

2.6 熒光顯微鏡下觀察。

注:熒光染料都存在淬滅的問題,建議染色后盡快檢測。

實驗示例:


293 細胞Hoechst/PI雙染檢測

 操作程序:293細胞胰酶消化后調(diào)整細胞密度為1×105/ml。接種到12孔板,1ml每孔,37度5%二氧化碳培養(yǎng)40小時,加入5 μl Hoechst 33342染色液和5 μl 碘化丙啶染色液,37度培養(yǎng)15分鐘,熒光顯微鏡觀察(40×)。



 
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