SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(1×)

SDS-PAGE Protein Loading Buffer（1×）

● 產(chǎn)品簡介：

SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(SDS-PAGE Protein Loading Buffer, 1×)，是一種經(jīng)過改良的以溴酚藍為染料的蛋白上樣緩沖液?？梢灾苯佑糜诩毎蚪M織樣品的裂解，并用于后續(xù)常規(guī)的SDS-PAGE蛋白樣品的上樣。使用該產(chǎn)品直接裂解蛋白樣品的優(yōu)點是比較便捷；缺點是裂解好的蛋白樣品不能用常規(guī)的蛋白定量方法測定蛋白濃度。這樣蛋白上樣量的均一性就較難控制，需要借助考馬斯亮藍等的染色結(jié)果或Western的檢測結(jié)果，來調(diào)整上樣量。當(dāng)細胞量或組織用量能控制得比較均一時，使用本裂解液直接裂解獲取蛋白樣品會比較便捷。

本緩沖液已經(jīng)含有還原劑DTT，有輕微刺激性氣味。

● 保存條件：

-20℃保存，開封后有效期1年。

●  使用方法：

1. 在常溫或不超過37℃的水浴中溶解SDS-PAGE上樣緩沖液(1×)。水浴溶解后立即常溫存放，盡量避免長時間置于水浴中。

2. 細胞樣品：

2.1 對于貼壁細胞：去除培養(yǎng)液，用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照6 孔板每孔（細胞數(shù)量~2.5×10⁶）加入150-250微升SDS-PAGE上樣緩沖液(1×)的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使SDS-PAGE上樣緩沖液(1×)和細胞充分接觸。通常SDS-PAGE上樣緩沖液(1×)接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。裂解后的樣品收集到1.5 ml離心管內(nèi)。

2.2 對于懸浮細胞：450 g 4℃離心5分鐘收集細胞，棄上清，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板（細胞數(shù)量~2.5×10⁶）每孔細胞加入150-250微升SDS-PAGE上樣緩沖液(1×)，再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。

3.組織樣品：

3.1 把組織剪切成細小的碎片。

3.2 按照每20毫克組織加入150-250微升SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(1×)的比例加入緩沖液。

注：如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的上樣緩沖液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少上樣緩沖液的用量。

3.3 用玻璃勻漿器勻漿或者用27#針頭抽打5-10次，直至充分裂解。

3.4 充分裂解后，將樣品收集到1.5 ml離心管內(nèi)。

注：如果組織樣品本身非常細小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈渦旋震蕩使樣品裂解充分。直接裂解的優(yōu)點是比較方便，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。

4. 95-100℃加熱10分鐘，以充分變性蛋白。

注：加熱前通常會發(fā)現(xiàn)蛋白樣品內(nèi)有粘稠的半透明狀物體，通常在上樣緩沖液內(nèi)加熱8-10分鐘后該粘稠的半透明狀物體消失。如果起始時細胞或組織的用量較大，基因組DNA含量較高，加熱10分鐘后有可能仍然比較粘稠或者有粘稠狀的半透明物體。此時需要再煮沸10分鐘或者補加適量1×的蛋白上樣緩沖液后再煮沸5分鐘。充分煮沸后一方面可以使結(jié)合在基因組DNA上的蛋白充分釋放，同時會導(dǎo)致基因組DNA的部分斷裂從而使粘稠感消失，這樣就不會影響后續(xù)的上樣操作了。

5. 樣品冷卻到常溫后，12000 rpm離心2分鐘，上清即可直接上樣到SDS-PAGE凝膠加樣孔內(nèi)。通常電泳至藍色染料到達膠的底端處附近即可停止電泳。

使用PL115 SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(1×)  發(fā)表部分文章列表：

1. [IF=8.947] Physiological cyclic stretching potentiates the cell–cell junctions in vascular endothelial layer formed on aligned fiber substrate.

Author: Yu Shi, Donghong Li, Bingcheng Yi, Han Tang, Tingting Xu, Yanzhong Zhang

Journal: Biomaterials Advances 157 (2024) 213751

Institution：College of Biological Science and Medical Engineering, Donghua University

Paper link：https://doi.org/10.1016/j.bioadv.2023.213751