超低分子量蛋白電泳試劑盒（貨號：RTD6120）

●     產(chǎn)品組成：

● 產(chǎn)品簡介：

本試劑盒含有超低分子量蛋白電泳（多肽電泳）全套試劑，可以用來檢測1-20kd的多肽大小。本試劑盒可配制至少10塊常規(guī)大小的PAGE膠（8×10cm）。具有以下特點：

1 適用范圍廣：2×多肽電泳緩沖液和2×PAA溶液中不含有SDS，適用于多肽的變性和非變性電泳。

2 分辨率高：凝膠緩沖液獨特配方，可以有效分離1-5kD多肽。

3 穩(wěn)定性高：凝膠緩沖液pH為中性，存放時間長。

4 使用方便：配制凝膠時只需1:1混合2×凝膠緩沖液和2×PAA溶液，加上APS和TEMED即可配制凝膠。

● 貯存和效期：

按照標(biāo)簽溫度貯存；開封后有效期一年。

● 使用說明：

一. 10% APS配制：

10% APS配制-5 ml：將APS干粉溶于5 ml滅菌水中，徹底溶解后分裝，1 ml/支，-20℃?zhèn)浯妫看稳∫还苁褂谩?0% APS應(yīng)盡量減少常溫存放時間，以防失效。10%APS在4℃有效期為一周，-20℃有效期6個月。若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時間延長，應(yīng)考慮更換使用-20度保存的10% APS。

二. 制膠：

I 配制分離膠

1．按照表一將不同體積的成分加入到小燒杯或離心管中混合；立即混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。

表一  （一塊1 mm mini膠用量）*

注： * 如非必須，不要使用厚度1.5mm的凝膠，盡量使用厚度0.75m和1mm的凝膠，這樣會減少電泳后染色和脫色的時間。

** 凝膠的聚合時間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時，聚合較快；冬天氣溫低時，聚合時間會延長?？梢愿鶕?jù)表二的標(biāo)準(zhǔn)條件調(diào)節(jié)催化劑的加入量。

表二 超低凝膠制備凝固時間表

2．在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液，然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3 cm的無水乙醇層，使凝膠表面保持平整。

3．靜置5-10分鐘，待分離膠和乙醇層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

II 配制濃縮膠

去除覆蓋在分離膠上的水層，用濾紙將殘留的水吸去。

1．按照表一將不同成分加入到小燒杯或離心管中混合；立即混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。

2．將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。

3．靜置20-30分鐘待凝膠聚合

三. 電泳：

1. 10×Tricine-Tris-SDS緩沖液配制：

將10×Tricine-Tris-SDS緩沖液（10×TTS）粉末（Cat No：CB010P）置于一干凈的一升燒杯中，加入500ml超純水，徹底攪拌混勻，不要調(diào)節(jié)pH，即配成500ml 10×TTS緩沖液。

表三 1×TTS緩沖液配制

注：伯樂Mini III電泳槽一次電泳使用500ml 1×TTS緩沖液。

2. 樣品處理：

  待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液[Cat No：TP050]等體積混合，95℃處理5-10分鐘后上樣。蛋白Marker一般已經(jīng)含有上樣緩沖液，根據(jù)說明書上樣（預(yù)染Marker不能加熱處理，非預(yù)染Marker上樣前一般要95℃處理5-10分鐘）。

將電泳槽的內(nèi)槽加滿1×TTS緩沖液，輕柔拔出梳子，用1ml移液器將梳孔吹洗干凈，將Marker或蛋白樣品（已經(jīng)過處理）加入點樣孔，穩(wěn)壓電泳（表四），至藍(lán)色指示前沿至分離膠下沿位置時即可停止電泳。整個電泳過程大約需要2.5-3個小時。

表四 多肽電泳條件

四. 染色（使用組分9-FastBlue蛋白染色液）：

● 用前必讀：

1 使用前如發(fā)現(xiàn)瓶中有少許沉淀，請混勻后使用。

2以下“使用方法”是針對0.75mm和1.0 mm厚度，10×10cm凝膠染色程序。

● 使用方法：

1. 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中，加入適量染色液（以剛剛覆蓋過膠面為適），條帶1-2分鐘即可見。

2. 搖床上常溫?fù)u動10-15分鐘。

3. 觀察結(jié)果。

● 注意事項：

1. 使用方法中的各種參數(shù)僅針對面積8×10cm或10×10cm，厚度0.75mm和1mm的凝膠，如果使用更大面積或更厚的凝膠，請加入更多的染色液并延長染色的時間。

2. 常規(guī)染色所需的漂洗，固定，脫色步驟都無必要。

3. 本染色液可以重復(fù)利用1-2次，敏感性會有輕微下降，請延長染色時間。

4. 本染色液有輕微腐蝕性，請帶手套操作。使用后，請蓋好瓶蓋，常溫密封保存。

 緩沖液配方：

1. 10x Tricine-Tris-SDS緩沖液 (1 L)    (Cat No:CB010P) 

組分濃度：1 MTris,1 MTricine, 1% SDS

Tris base 121.1 g

Tricine    179.2 g

SDS         10 g

ddH₂O      to1 L 

Do not adjust the pH (~pH 8.3)

2. 2×Tricine蛋白樣品加樣緩沖液（10ml）  (Cat No:TP050)

組分濃度：100 mMTris-HCl, pH 6.8, 24% glycerol, 8% SDS,0.2MDTT，0.02% Coomassie Brilliant Blue G-250

1ml 1MTris-Cl pH6.8

2.4ml 甘油

0.8g  SDS

0.31gDTT

2mg 考馬斯亮藍(lán)G-250

用滅菌ddH₂O定容至10ml

混勻分裝-20℃貯存?zhèn)溆?

多肽電泳配套試劑

使用該產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表：

1. [2016 IF=1.75] Metal-Chelate Affinity Precipitation with Thermo-Responsive Polymer for Purification of ε-Poly-L-Lysine.

Product：RTD6120 超低分子量蛋白電泳試劑盒

Author: Sipeng Li, Zhaoyang Ding, Jifu Liu, Xuejun Cao.

Journal: Appl Biochem Biotechnol. May 20 2017.

Institution：East ChinaUniversity of Science and Technology

Paper link： https://link.springer.com/article/10.1007/s12010-017-2495-3

2. [2020 IF=2.896] Rapid and sensitive detection of Staphylococcus aureus and Klebsiella pneumonia based on bacitracin-modified Fe3O4@PDA magnetic beads combined with matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry. 

Product：RTD6120 超低分子量蛋白電泳試劑盒；RTD6110 彩虹預(yù)染超低分子量蛋白Marker

Author: Feng Qin，Xiangmin Zhang 

Journal: Analytical Methods 2021，13，2804

Institution： Department of Chemistry, Fudan University,

Paper link：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34075956/